多肽是α-氨基酸 以肽鏈連接在一起而形成的 化合物。
分類:由兩個(gè)氨基酸分子脫水縮合而成的化合物叫做二 肽,同理類推還有三肽、四肽、五肽等。通常由10~100氨 基酸分子脫水縮合而成的化合物叫多肽。它們的分子量低 于10,000Da(Dalton道爾頓)。由2~10個(gè)氨基酸組成的 肽稱為寡肽(小分子肽);10~50個(gè)氨基酸組成的肽稱為 多肽;由50個(gè)以上的氨基酸組成的肽就稱為蛋白質(zhì)。
1、生物合成方法
2、酶催化合成法
3、化學(xué)合成方法(包含液相合成和固相合成)
多肽固相合成
定義:
從C端(羧基端)向N端(氨基端)重復(fù)添加氨基酸的過程。
設(shè)計(jì)方法:
先將所要合成肽鏈的羥末端氨基酸(C端)的羥基以共價(jià)鍵的結(jié)構(gòu)同一個(gè)不溶性的高分子樹脂相連,然后以此結(jié)合在固相載體上的氨基酸作為氨基組份經(jīng)過脫去 氨基保護(hù)基并同過量的活化羧基組分反應(yīng),接長肽鏈。重復(fù)(縮合→洗滌→去保護(hù)→洗滌→下一輪縮合)操作,達(dá)到所要合成的肽鏈長度,最后將肽鏈從樹脂上裂解下來,經(jīng)過純化等處理,即得所要的多肽。
分類:
其中α-氨基用BOC(叔丁氧羰基)保護(hù)的稱為BOC固相合成法,α-氨基用FMOC(9-芴甲氧羰基)保護(hù)的稱為FMOC固相合成法,
固相多肽合成中,主要是通過檢測樹脂上游離氨基來判斷連接效率,檢測方法稱為Kaiser方法,其檢測結(jié)果,如果有游離氨基的時(shí)候,顯示蘭色,或紅褐色(pro,ser,His)。
Kaiser試劑包括:
A,5%茚三酮的乙醇溶液
B,80%苯酚的乙醇溶液
C,2%0.001M KCN的吡啶溶液
配制中的吡啶需要經(jīng)過茚三酮處理后,重蒸后再使用。檢測過程,取少量樹脂,加入A,B,C各2-3滴,105-110℃下加熱5min,如果溶液有蘭色,或樹脂出現(xiàn)蘭色,紅褐色,表明還有游離氨基,否則說明連接完全。